Получение моноклонального антитела для направленной иммунотерапии аутоиммунного анкилозирующего спондилита (АС, болезнь Бехтерева)
Проект ФЦП, соглашение № 14.607.21.0158
Руководитель: Чудаков Дмитрий Михайлович, д.б.н.
Срок выполнения: 2016–2018 гг.
В ходе выполнения проекта по теме «Получение моноклонального антитела для направленной иммунотерапии аутоиммунного анкилозирующего спондилита (АС, болезнь Бехтерева)» по Соглашению о предоставлении субсидии от 03 октября 2016 года №14.607.21.0158 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на этапе № 1 в период с 3 октября по 30 декабря 2016 года выполнялись следующие работы:
При этом были получены следующие результаты:
Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта и позволяют продолжить работы. В частности, на этапе 2 полученные библиотеки будут отсеквенированы и будет найден консенсусный ТКР, ответственный за развитие АС. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчётном этапе исполненными надлежащим образом.
В ходе выполнения проекта по теме «Получение моноклонального антитела для направленной иммунотерапии аутоиммунного анкилозирующего спондилита (АС, болезнь Бехтерева)» по Соглашению о предоставлении субсидии от 03 октября 2016 года №14.607.21.0158 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на этапе № 2 в период с 01 января по 31 декабря 2017 года выполнялись следующие работы:
Коллекция образцов библиотек ТКР, созданная на этапе №1, была существенно расширена за счет получения библиотек отдельных фракций Т-лимфоцитов больных АС, включая образцы Т-клеток сайтов воспаления. Было проведено генотипирование аллелей МНС и подтвержден статус по HLA-B*27 всех доноров, образцы которых применялись для решения задач проекта. Было выполнено секвенирование всех подготовленных библиотек кДНК ТКР и проведена биоинформатическая обработка массивов секвенирования, включая анализ полученных данных о структуре репертуара Т-клеток больных АС. В результате дальнейшей обработки данных была идентифицирована группа Т-клеточных клонотипов, вовлеченных в развитие аутоиммунной реакции. Выявленная группа клонотипов обладает высокой степенью гомологии структуры ТКР, что позволяет идентифицировать консенсусную последовательность целевого ТКР для создания специфического моноклонального антитела.
За время выполнения этапа коллектив принял участие в мероприятиях «III ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ФОРУМ» с устным докладом на тему «Индивидуальные репертуары иммунных рецепторов: наука и практика» и «45-й семинар Совета молодых ученых ИБХ РАН» с устным докладом на тему «Характеристические клоны Т-лимфоцитов у пациентов со спондилоартропатиями».
Результаты, полученные в ходе выполнения работ, обобщены и изложены в заявке на изобретение и статьях в научных журналах:
Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта и позволяют продолжить работы. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчётном этапе исполненными надлежащим образом.
В ходе выполнения проекта по теме «Получение моноклонального антитела для направленной иммунотерапии аутоиммунного анкилозирующего спондилита (АС, болезнь Бехтерева)» по Соглашению о предоставлении субсидии от 03 октября 2016 года №14.607.21.0158 с Министерством науки и высшего образования Российской Федерации в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на этапе № 3 в период с 01 января по 31 декабря 2018 года выполнялись следующие работы:
На первом этапе выполнения работ была создана коллекция образцов библиотек ТКР больных АС и здоровых доноров, HLA-B*27 позитивных и HLA-B*27 негативных.
На втором этапе выполнения работ созданная коллекция была существенно расширена за счет получения библиотек отдельных фракций Т-лимфоцитов больных АС, включая образцы Т-клеток сайтов воспаления. Было проведено генотипирование аллелей МНС и подтвержден статус по HLA-B*27 всех доноров, образцы которых применялись для решения задач проекта. Было выполнено секвенирование всех подготовленных библиотек ТКР и проведена биоинформатическая обработка массивов секвенирования, включая анализ полученных данных о структуре репертуара Т-клеток больных АС. В результате дальнейшей обработки данных была идентифицирована группа Т-клеточных клонотипов, вовлеченных в развитие аутоиммунной реакции. Выявленная группа клонотипов обладает высокой степенью гомологии структуры ТКР, что позволяет идентифицировать консенсусную последовательность целевого ТКР для создания специфического моноклонального антитела.
На третьем этапе выполнения работ было получено моноклональное антитело, специфичное к консенсусному ТКР, и показана высокая специфичность связывания этого антитела с антигеном. Также продемонстрирована цитотоксичность этого антитела для клеток, экспрессирующих консенсусный ТКР.
За время выполнения этапа коллектив принял участие в мероприятиях Cell-Weizmann Institute of Science Symposium: Next Gen Immunology и III Всероссийский конгресс «Аутоиммунные и иммунодефицитные заболевания»
Результаты, полученные в ходе выполнения работ, обобщены и изложены в заявках на изобретения и статьях в научных журналах:
Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства на отчётном этапе и по Соглашению в целом исполненными надлежащим образом.