Доклинические исследования лекарственного средства стероидной структуры для гормональной заместительной терапии гестагенной недостаточности

Проект в рамках федеральной целевой программы «Фарма-2020» , соглашение № 14.N08.11.0133

Руководитель: Шимановский Николай Львович, д.м.н., профессор, член-корр. РАН

Срок выполнения: 2017–2019 гг.

Выполнение первого этапа ПНИЭР (2017 г.)

На 1 этапе проекта «Разработка готовой лекарственной формы лекарственного средства и оптимизация технологии его получения» были выполнены следующие работы:

  • Выполнен аналитический обзор информационных источников по теме проекта;
  • Проведены патентные исследования;
  • Выполнено исследование физико-химических свойств фармацевтической субстанции (ФС);
  • Выполнены работы по оптимизации лабораторной технологии получения ФС и разработан лабораторный регламент получения ФС;
  • Разработаны аналитические методики анализа (контроля качества) ФС;
  • Выполнена наработка опытных образцов ФС для разработки готовой лекарственной формы (ГЛФ) и контроль качества опытных образцов ФС;
  • Выполнена закладка опытных образцов ФС на хранение для изучения стабильности;
  • Выполнена разработка состава ГЛФ;
  • Выполнена разработка аналитических методик анализа (контроля качества) ГЛФ;
  • Выполнены разработка лабораторной технологии и лабораторного регламента получения ГЛФ нового вещества стероидной структуры для гормональной заместительной терапии гестагенной недостаточности;
  • Выполнено масштабирование технологии получения ГЛФ;
  • Выполнена наработка опытных образцов ГЛФ;
  • Выполнен контроль качества опытных образцов ГЛФ;
  • Выполнена закладка опытных образцов ГЛФ на хранение для изучения стабильности;
  • Выполнена разработка плана доклинических исследований ГЛФ;
  • Выполнена разработка протоколов доклинических исследований ГЛФ.

При этом были получены следующие основные научно-практические результаты:

  • Разработанная ГЛФ - таблетки - удовлетворяет требованиям государственной фармакопеи, изд. ГФ XIII, ОФС.1.4.1.0015.15 Таблетки.
  • Подана заявка на изобретение по оптимизированной технологии получения ФС.
  • Наработанные образцы ФС и ГЛФ прошли испытание на контроль качества.
  • Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта и позволяют продолжить работы. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчётном этапе исполненными надлежащим образом.
Выполнение второго этапа ПНИЭР (2018 г.)

В ходе выполнения проекта по теме «Доклинические исследования лекарственного средства стероидной структуры для гормональной заместительной терапии гестагенной недостаточности» по Государственному контракту №14.N08.11.0133 от 28.04.2017 г с Министерством науки и высшего образования Российской Федерации в рамках федеральной целевой программы «ФЦП «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» на этапе № 2 в период с 01 января по 31 декабря 2018 года выполнялись следующие работы:

  • Исследована специфическая фармакологическая активность таблеток Гестобутаноила на кроликах и крысах в тесте Клауберга-Макфейла. ЭД составила 0,0015 мг/кг.
  • Проведена оценка дополнительных аспектов фармакологической активности ГЛФ:
    - контрацептивной активности на половозрелых самках крыс;
    - антиовуляторной активности на половозрелых кроликах-самках;
    - андрогенной активности на перипубертатных крысах-самцах;
    - эстрогенной активности на неполовозрелых самках крыс;
    - глюкокортикоидной и минералокортикоидной активности на неполовозрелых крысах-самках.
    Гестобутаноил обладает 100% контрацептивной активностью в комбинации с этинилэстрадиолом, антиандрогенным действием, не имеет побочного эстрогенного, глюкокотикоидного и минералкортикоидного действия.
  • Исследовано взаимодействие ГЛФ – таблеток Гестобутаноила с другими препаратами на крысак-самках, выявившее участие системы цитохрома Р450 CYP3A4 в метаболизме таблеток Гестобутаноила.
  • Исследован механизм действия ГЛФ подтвердивший, что ЛФ Гестобутаноил имеет высокое сродство к рецепторам прогестерона и превосходит по сродству к рецепторам прогестерона природный прогестерон и препарат сравнения МПА в 6,5 и 5,18 раз соответственно. Гестобутаноил специфически регулирует экспрессию рецепторов прогестерона в матке и яичниках крыс.
  • Проведено исследование острой токсичности ГЛФ, в котором в качестве тест-систем в экспериментах были использованы половозрелые самцы и самки аутбредных белых крыс и мышей, в котором не были достигнуты средние значения летальной дозы (ЛД50, мг/кг) при однократном, внутрижелудочном введении ЛФ Гестабутаноила в диапазоне доз 625 - 5000 мг/кг (по субстанции). Лекарственная форма ЛФ Гестабутаноил согласно гармонизированной системе классификации токсичности и опасности (GHS), Межгосударственного стандарта (ГОСТ 32644 - 2014) и классификации OECD (Test №423:2001. IDT) относится к 4 категории веществ – малотоксичным веществам.
  • Исследована хроническая токсичность ГЛФ на половозрелых аутбредныхе белых крысах – самках и кроликах – самках породы Шиншилла в дозах в 10 и 100 раз превосходящих терапевтическую дозу – 0,25 мг/кг при ежедневном (1 раз в день в течение 30 дней) внутрижелудочном введении. ЛФ Гестабутаноила (таблетки, 0,002 г) не вызывает токсических эффектов со стороны органов и систем, а также летальности животных при хроническом введении в дозах, в 10 и 100 раз превосходящих терапевтическую дозу.
  • Исследована репродуктивная токсичность ГЛФ Гестабутаноил, таблетки, 0,002 г при внутрижелудочном введении препарата самкам-крыс в дозах 0,25 мг/кг и 2,5 мг/кг (расчетная доза, соответствующая терапевтической дозе и в 10 раз выше. Исследование эмбрио- и фетотоксического действия препарата, регистрируемого в постнатальном периоде развития, показало, что введение препарата Гестобутаноил с 6-го по 19-ый дни беременности в дозах 0,25 и 2,5 мг/кг (расчетная доза, соответствующая терапевтической и 10 раз выше) не оказывало негативного влияния на развитие потомства первого поколения, не влияло на смертность, динамику массы тела, физического и эмоционально-двигательного развития потомства первого поколения. Тератогенного действия на плоды при действии препарата не выявлено.
  • Исследованы аллергенная активность и иммунотоксичность препарата Гестобутаноил при хроническом, повторном и однократном введении. Комплексное изучение аллергизирующих свойств препарата при однократном введении мышам, повторном введении морским свинкам и хроническом введении крысам включало оценку реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типа, обусловленных как гуморальными антителами, так и сенсибилизированными клетками. Анализ полученных данных свидетельствует об отсутствии сенсибилизирующей активности препарата Гестобутаноила.
  • Исследована фармакокинетика ГЛФ Гестобутаноил, таблетки, 0,002 г при внутрижелудочном введении препарата самкам крыс в трех дозах и самкам кроликов при однократном и многократном введении. Нижний предел количественного определения составил 10 нг/мл. В исследовании ФК Гестобутаноила при однократном введении было показано, что сам ГБ не определяется в крови. При этом в крови определялись его два метаболита АМП-17 и МА. Были получены фармакокинетические параметры. свидетельствующие о том, что ГБ достаточно быстро метаболизируется до АМП-17 (Тmax.=1,5 час). Достижение максимальной концентрации МА происходит за 3 ч. Происходит ступенчатая биотрансформация, и МА образуется из АМП-17. Так же было обнаружено, что метаболит АМП-17 хорошо проникает в периферические ткани (Vd=236,5), а метаболит МА имеет меньший объем распределения (5,9 л). Полученные фармакокинетические параметры при многократном введении ГБ крысам в течение 5 дней показали отсутствие эффекта накопления и депонирования метаболитов, что косвенно указывает также на отсутствие накопления ГБ в организме. При этом на пятый день введения наблюдался эффект увеличения объема распределения и параллельно снижение максимальных концентраций метаболитов и их биодоступности. Это наблюдение показывает, что происходит насыщение ферментных систем и в целом замедление путей метаболизма, которые ведут к образованию АМП-17 и МА. Индуцирование работы ферментных систем при помощи фенобарбитала не повлияло на скорость достижения максимальных концентраций метаболитов. При этом параметры, описывающие элиминацию метаболитов показали, что скорость их исчезновения из организма увеличилась примерно в два раза. Так же в сыворотке крови определился ГБ, что предположительно стало следствием конкурирования фенобарбитала и Гестобутаноила за биотрансформацию. Сравнение фармакокинетики крыс и кроликов показало, что в целом кинетические профили метаболитов одинаковы.

Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта и позволяют продолжить работы. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчётном этапе исполненными надлежащим образом.