В ходе выполнения проекта по теме «Доклинические исследования лекарственного средства, действующего на нейротрофины – BDNF и/или NGF с активацией MAP киназы, для лечения последствий ишемического инсульта)» по Соглашению о предоставлении субсидии от 22 ноября 2017 года №№ 14.N08.11.0181с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на этапе № 1 в период с 22 ноября по 6 декабря 2017 года выполнялись следующие работы:

• Подготовлен аналитический обзор информационных источников.
• Проведено патентное исследование.
• Разработана лабораторная технология получения лекарственного средства (далее - ЛС).
• Разработаны методики анализа качества опытных образцов ЛС.
• Произведена наработка опытных образцов ЛС.
• Проведен анализ качества опытных образцов лекарственного средства, закладка образцов на хранение для изучения стабильности.
• Подготовлен промежуточный отчет ПНИЭР.
• Проведена предварительная (частичная) валидация методик контроля качества лекарственного средства.
• Подготовлен отчет о материально-техническом обеспечении.

Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта и позволяют продолжить работы.

Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчётном этапе исполненными надлежащим образом.

В ходе выполнения работ по 2 этапу Госконтракта было проведено углубленное изучение специфической активности лекарственного средства. На модели полушарного инсульта мозга, которая создавалась методом эндоваскулярной транзиторной окклюзии средней мозговой артерии, была показана эффективность лекарственного средства на ос-нове производного 4-фенилпирролидинона-2, в дозе 1ЭТД.

Фармакокинетические исследования лекарственного средства показали, что в интервале исследованных доз фармакокинетика «VRF_11» носит дозозависимый характер. Установлено, что экскреция «VRF_11» происходит как через почки, так и с каловыми массами.

• Наработаны опытные образцы лекарственного средства для проведения доклинических исследований и проведен их контроль качества.
• В результате проведенных исследований острой токсичности «VRF_11» установлено, что при однократном внутривенном введении максимальных доз препарата «VRF_11», гибели животных не наблюдалось. LD50 для мышей и крыс не была достигну-та при введении максимально возможной дозы. Не было выявлено влияния на массовые коэффициенты органов при однократном внутривенном введении белым аутбредным мышам. Не выявлено разницы по приросту массы тела между группами с введением исследуемого препарата и контрольными группами при однократном внутривенном введении белым аутбредным крысам в острых дозах. В экспериментах не установлено половых и межвидовых различий.
• При изучении хронической токсичности (30 дней) не отмечалось гибели животных при внутривенном введении «VRF_11» в эквитерапевтической и превышающих эквитерапевтическую в 2 и 3 раза дозах (2 ЭТД и 3 ЭТД). Результаты изучения хронической токсичности показали, что многократное внутривенное введение исследуемого препарата кроликам не вызывало нарушений функционального состояния основных органов и систем организма. Не выявлено местнораздражающего действия исследуемого препарата при его многократном внутривенном введении кроликам.
• Результаты изучения иммунотоксичности лекарственного средства показали, что «VRF_11» в дозе 10,8 мг/кг и 108 мг/кг не вызывает активацию гуморального и клеточного звена иммунитета как у самцов, так и у самок. Изучение аллергенности показало, что «VRF_11» не обладает аллергическими свойствами. В результате проведенных исследований репродуктивной токсичности установле-но, что внутривенное введение препарата «VRF_11» не оказывало влияния на генеративную функцию.
• При изучении мутагенности доказано, что при воздействии эквитерапевтических и высоких доз препарат не обладает цитогенетической и мутагенной активностью, а также не оказывает генотоксического действия в экспериментах in vitro и in vivo.
• В результате исследования препарата «VRF_11» на пирогенность, согласно XIII Государственной фармакопее Российской Федерации, ОФС.1.2.4.0005.15, было установ-лено, что препарат в тест-дозе 128 мг/кг апирогенен. Исследование на пирогенность проводилось на кроликах. За 18 ч до испытания кроликов лишали корма без ограничения воды. В исследовании было использовано 10 кроликов.
• На основании фармакокинетических исследований по изменению содержания препарата «VRF_11», порошок для приготовления раствора для инъекций в крови и таких органах, как печень, почки, кора головного мозга показано, что в интервале исследованных доз фармакокинетика препарата носит дозозависимый характер.
• В результате проведенных исследований на аутбредных мышах установлено, что при однократном внутривенном введении терапевтических доз препарата «VRF_11», порошок для приготовления раствора для инъекций, наблюдалось усиление экспрессии целевых генов, что подтверждает механизм действия препарата «VRF_11» через нейротрофины – BDNF и/или NGF с активацией МАР киназы, для лечения последствий ишемического инсульта.
• Проведенное масштабирование лабораторной технологии получения разрабатываемого лекарственного средства не привело к изменению основных показателей качества получаемого продукта (чистота, массовое содержание основного вещества).
• Была проведена оптимизация лабораторной технологии получения ЛС с целью уменьшения расхода сырья и растворителей, снижения трудозатрат и увеличения выхода конечного продукта, а также повышения безопасности отдельных стадий.
• Была проведена валидация основных процессов оптимизированной технологии получения ЛС.

Полученные результаты соответствуют Техническому заданию проекта и позволяют продолжить работы. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчётном этапе исполненными надлежащим образом.

В ходе выполнения работ по отчётному 3 этапу Госконтракта было проведено: изучение стабильности и сохранения физико-химических свойств ЛС, после длительного (в течение 20 месяцев) хранения при 23 ± 2°С и методом ускоренного хранения (в течении 720 часов, что соответствует 24 месяцам). Исследования стабильности физико-химических свойств ЛС показали, что за период хранения в естественных условиях параметры качества удовлетворяли требованиям спецификации.

В рамках заключительного третьего этапа Государственного контракта проведено дополнительное патентное исследование и подана 1 заявка на изобретение: «Способ крупномасштабного синтеза калиевой соли 2-[2-(2-оксо-4-фенилпирролидин-1-ил)ацетамидо]этансульфокислоты».

Были подготовлены документы, входящие в регистрационное досье на препарат: разработан проект протокола клинического исследования лекарственного препарата для медицинского применения, проект брошюры исследователя, проект инструкции по медицинскому применению лекарственного препарата, подготовлена патентная заявка на изобретение.